鈣離子是生物體內最重要的信號信使之一,參與肌細胞收縮、腺細胞分泌、神經遞質釋放、細胞增殖、 分化和凋亡等過程,鈣離子濃度可以表征突觸傳遞和神經元活動。
鈣離子成像是指利用鈣離子指示劑監測細胞內鈣離子濃度的方法。在神經系統研究方面,在體(in vivo)或者離體(in vitro)實驗中,鈣成像技術被廣泛應用于同時監測成百上千個神經元內鈣離子的變化,從而檢測神經元的活動情況。
鈣離子是生物體內最重要的信號信使之一,參與肌細胞收縮、腺細胞分泌、神經遞質釋放、細胞增殖、 分化和凋亡等過程,鈣離子濃度可以表征突觸傳遞和神經元活動。
鈣離子成像是指利用鈣離子指示劑監測細胞內鈣離子濃度的方法。在神經系統研究方面,在體(in vivo)或者離體(in vitro)實驗中,鈣成像技術被廣泛應用于同時監測成百上千個神經元內鈣離子的變化,從而檢測神經元的活動情況。
鈣離子成像技術需要根據實驗要求選擇合適的鈣離子指示劑。廣泛使用的鈣離子指示劑有化學性鈣離子指示劑(Chemical Indicators)和基因編碼鈣離子指示劑(Genetically encoded calcium indicators,GECIs)兩類。
目前常用的基因編碼鈣離子指示劑就是將來自于綠色熒光蛋白(GFP)及其變異體(例如循環排列GFP、YFP、CFP)的熒光蛋白質,與鈣調蛋白(CaM)和肌球蛋白輕鏈激酶M13域融合。當鈣離子濃度上升時,會導致M13與CaM結合,從而改變cpEGFP的構象,將其從無熒光的狀態變為綠色熒光。
XCaMP系列:
基于CaMKK為骨架,通過一系列的突變篩選,包括四種不同顏色:藍色的XCaMP-B,綠色的XCaMP-G,橙色的XCaMP-O和紅色的XCaMP-R。其中XCaMP-G的熒光強度比GCaMP6強,動作電位刺激誘發的鈣離子反應性能也比GCaMP6有明顯提高。結合特定的神經元特異的表達方法,可實現在自由活動狀態下同時監測特定行為中三種不同神經元類型的活動;結合雙光子顯微鏡,進行微結構功能成像,實現對突觸前和突觸后結構同時雙色成像。
CaMPARI:
一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術,包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。 其原理在于,CaMPARI蛋白在正常狀態下會發出綠色熒光,而如果對這種蛋白同時使用高濃度鈣離子與紫外光處理,它就會不可逆、永久地轉變成另一種能發出紅色熒光的構象, 即實現將瞬間的神經元活動變成永久的紅色熒光蛋白表達。研究人員通過轉基因技術將這種新型蛋白導入到實驗動物的神經系統中,然后用高強度的紫外光照射動物的大腦,通過檢查熒光,找到發紅色熒光的神經元,這些神經元即是在紫外光照射期間活躍的神經元。 由于紫外光可以對著整個大腦進行照射,所以理論上,人們可以對全腦進行檢查。
jRGECO1a&RcaMP:
紅色的鈣離子敏感蛋白,可以同GCaMP一起使用,標記同一小鼠同一腦區兩類細胞的活動不同的神經元類型。
GCaMP-X:
無損傷鈣離子探針,可保護依賴于L型鈣通道的興奮-轉錄耦合免受干擾,同時仍表現出部分GCaMP的優良Ca2+感應特性。適合超長時程鈣信號的監測。
以AAV為載體的GCaMP是超強的鈣離子指示劑,是目前廣泛應用的鈣離子研究工具,其突出優勢是可以通過特異的啟動子和定位序列實現在特定類型細胞或亞細胞結構表達。
吉滿生物可根據您的成像實驗為您提供相應的鈣成像AAV載體。
吉滿ID | 質粒名稱 |
7300 | GPAAV-hSyn1-mRuby2-GSG-P2A-GCaMP6f |
7305 | GPAAV-hSyn1-GCaMP6s-P2A-nls-dTomato |
7306 | GPAAV-hSyn1-GCaMP6f-P2A-nls-dTomato |
7319 | GPAAV-CAG(CAGGSA)-Flex-GCaMP6f |
8680 | GPAAV-CaMKII-GCaMP6f-P2A-nls-dTomato |
9711 | GPAAV-hSyn-GCaMP6f |
9712 | GPAAV-CaMKIIa-GCaMP6f |
9713 | GPAAV-CAG(CAGGSA)-GCaMP6f |
9714 | GPAAV-EF1a-DIO-GCaMP6f-P2A-nls-dTomato |
9717 | GPAAV-CaMKIIa-GCaMP6s |
9718 | GPAAV-CaMKIIa-GCaMP6s-P2A-nls-dTomato |
9719 | GPAAV-CAG(CAGGSA)-GCaMP6s |
9720 | GPAAV-EF1a-DIO-GCaMP6s |
9721 | GPAAV-EF1a-DIO-GCaMP6f |
9722 | GPAAV-EF1a-DIO-GCaMP6s-P2A-nls-dTomato |
9736 | GPAAV-hSyn-FLEX-GCaMP6f |
9738 | GPAAV-hSyn-GCaMP6s |
9740 | GPAAV-hSyn-FLEX-GCaMP6s |
9963 | GPAAV-hSyn-DIO-GCaMP6m |
9965 | GPAAV-CaMKIIa-GCaMP6m |
16144 | GPAAV-CMV-GCaMP6f |
16145 | GPAAV-CMV-GCaMP6f-3×Flag |
16146 | GPAAV-CMV-GCaMP6m-3×Flag |
16147 | GPAAV-CMV-GCaMP6s-3×Flag |
鈣離子是生物體內最重要的信號信使之一,參與肌細胞收縮、腺細胞分泌、神經遞質釋放、細胞增殖、 分化和凋亡等過程,鈣離子濃度可以表征突觸傳遞和神經元活動。
鈣離子成像是指利用鈣離子指示劑監測細胞內鈣離子濃度的方法。在神經系統研究方面,在體(in vivo)或者離體(in vitro)實驗中,鈣成像技術被廣泛應用于同時監測成百上千個神經元內鈣離子的變化,從而檢測神經元的活動情況。
鈣離子成像技術需要根據實驗要求選擇合適的鈣離子指示劑。廣泛使用的鈣離子指示劑有化學性鈣離子指示劑(Chemical Indicators)和基因編碼鈣離子指示劑(Genetically encoded calcium indicators,GECIs)兩類。
目前常用的基因編碼鈣離子指示劑就是將來自于綠色熒光蛋白(GFP)及其變異體(例如循環排列GFP、YFP、CFP)的熒光蛋白質,與鈣調蛋白(CaM)和肌球蛋白輕鏈激酶M13域融合。當鈣離子濃度上升時,會導致M13與CaM結合,從而改變cpEGFP的構象,將其從無熒光的狀態變為綠色熒光。
XCaMP系列:
基于CaMKK為骨架,通過一系列的突變篩選,包括四種不同顏色:藍色的XCaMP-B,綠色的XCaMP-G,橙色的XCaMP-O和紅色的XCaMP-R。其中XCaMP-G的熒光強度比GCaMP6強,動作電位刺激誘發的鈣離子反應性能也比GCaMP6有明顯提高。結合特定的神經元特異的表達方法,可實現在自由活動狀態下同時監測特定行為中三種不同神經元類型的活動;結合雙光子顯微鏡,進行微結構功能成像,實現對突觸前和突觸后結構同時雙色成像。
CaMPARI:
一種能夠兼顧全局和微觀的新型鈣成像技術,包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。 其原理在于,CaMPARI蛋白在正常狀態下會發出綠色熒光,而如果對這種蛋白同時使用高濃度鈣離子與紫外光處理,它就會不可逆、永久地轉變成另一種能發出紅色熒光的構象, 即實現將瞬間的神經元活動變成永久的紅色熒光蛋白表達。研究人員通過轉基因技術將這種新型蛋白導入到實驗動物的神經系統中,然后用高強度的紫外光照射動物的大腦,通過檢查熒光,找到發紅色熒光的神經元,這些神經元即是在紫外光照射期間活躍的神經元。 由于紫外光可以對著整個大腦進行照射,所以理論上,人們可以對全腦進行檢查。
jRGECO1a&RcaMP:
紅色的鈣離子敏感蛋白,可以同GCaMP一起使用,標記同一小鼠同一腦區兩類細胞的活動不同的神經元類型。
GCaMP-X:
無損傷鈣離子探針,可保護依賴于L型鈣通道的興奮-轉錄耦合免受干擾,同時仍表現出部分GCaMP的優良Ca2+感應特性。適合超長時程鈣信號的監測。
以AAV為載體的GCaMP是超強的鈣離子指示劑,是目前廣泛應用的鈣離子研究工具,其突出優勢是可以通過特異的啟動子和定位序列實現在特定類型細胞或亞細胞結構表達。
吉滿生物可根據您的成像實驗為您提供相應的鈣成像AAV載體。
吉滿ID | 質粒名稱 |
7300 | GPAAV-hSyn1-mRuby2-GSG-P2A-GCaMP6f |
7305 | GPAAV-hSyn1-GCaMP6s-P2A-nls-dTomato |
7306 | GPAAV-hSyn1-GCaMP6f-P2A-nls-dTomato |
7319 | GPAAV-CAG(CAGGSA)-Flex-GCaMP6f |
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9719 | GPAAV-CAG(CAGGSA)-GCaMP6s |
9720 | GPAAV-EF1a-DIO-GCaMP6s |
9721 | GPAAV-EF1a-DIO-GCaMP6f |
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