RNA干擾(RNA interference, RNAi) 是一種進化上保守的抵御轉基因或外來病毒侵犯的防御機制。將與靶基因的轉錄產物mRNA存在同源互補序列的雙鏈RNA(double strand RNA, dsRNA) 導入細胞后,能特異性地降解該mRNA,從而產生相應的功能表型缺失。
RNAi提供了一種經濟、快捷、高效的抑制特異基因表達的技術手段,有助于研究該基因在生物模型系統中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成為病毒性疾病、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段?,F今發現的主要起干擾作用的RNAi主要有兩類小分子RNA:一類是microRNA(miRNA);另一類是siRNA (small interfering RNA)。
siRNA制備的方法一般有:化學合成siRNA,哺乳動物細胞載體shRNA克隆和慢病毒載體shRNA克隆。
將慢病毒載體的shRNA質粒與慢病毒包裝輔助質粒和包膜質粒共轉染293T細胞,收集上清進行濃縮純化,獲取高滴度的慢病毒,相對于SiRNA和shRNA質粒,shRNA慢病毒的感染范圍更廣,如依賴轉染試劑難轉染的細胞:原代細胞、懸浮細胞等,并可實現穩定、長效抑制基因表達。
干擾原理(圖片來源:RNA Therapeutics Institute)