轉錄因子是一類參與基因轉錄調控的重要調節因子。不同轉錄因子的DNA結合結構域識別不同基因啟動子區特定的堿基序列,行使抑制或激活該基因轉錄的功能。將目的基因啟動子區域(通常取轉錄起始位點TSS上游-2000bp)、或針對結合位點進行突變、或分段截斷序列,構建到報告基因載體luciferase的上游,共轉染轉錄因子過表達質粒,通過熒光素酶活反映轉錄因子對啟動子活性的調控作用。
啟動子是基因的一個組成部分,作為基因表達的“開關”,控制基因表達的起始時間和表達的程度。啟動子本身并不控制基因活動,而是通過與稱為轉錄因子的這種具有特殊結構的蛋白質結合而控制基因活動的。也就是說啟動子是指能啟動基因轉錄的序列,啟動子對基因的表達是必須的,如果一個基因要表達,那么它的前面一定要有一段啟動子序列,RNA聚合酶等蛋白會結合到啟動子上才能開始基因的轉錄。但真核生物基因在無轉錄因子時處于不表達狀態,因為RNA聚合酶自身無法啟動基因的轉錄,只有當轉錄因子結合到其識別的DNA序列上后,基因才開始表達。
常用載體:pGL3-Basic(左) 、pGL3-Promoter(右)