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克隆形成
簡介

單個細胞在體外增殖6代以上(時間約1周以上),其后代所形成的細胞群體,稱為集落或克隆。每個克隆含有50個以上的細胞,大小在0.3 - 1.0mm之間。細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數, 但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖并形成克隆。只有同時具有貼壁和增殖活力的細胞才會形成克隆。

克隆形成率反映細胞的獨立生存能力的強弱,用于評價細胞群體依賴性和增殖能力。由于細胞生物學性狀不同,細胞克隆形成率差別也很大,一般初代培養細胞克隆形成率弱,傳代細胞系強; 二倍體細胞克隆形成率弱,轉化細胞系強;正常細胞克隆形成率弱,腫瘤細胞強??寺⌒纬陕逝c接種密度有一定關系,做克隆形成率測定時,接種細胞一定要分散成單細胞懸液,直接接種在培養皿中,持續一周以上,隨時檢查,到細胞形成克隆時終止培養。

特點

克隆形成實驗可用于評價不同殺傷因素(藥物、基因等)對腫瘤細胞增殖能力或群體依賴性的敏感性,評價細胞在體內成瘤性,癌細胞不一定都可以在體內成瘤,但若體外克隆能力越強,即表明體內成瘤性越強,算是一種模擬體內成瘤的體外實驗。

依據采用的培養介質的不同,分為平板克隆和軟瓊脂克隆兩類。

(1)平板克隆形成:細胞培養在培養基中,應用于貼壁的細胞。

將細胞分離成單細胞懸液,在培養皿中接種培養,根據集落形成數量和大小來檢測細胞增殖能力和致瘤性。適用于貼壁生長細胞和正常培養的細胞。


平板克隆形成.png

平板克隆形成實驗步驟


(2)軟瓊脂克隆形成:細胞被瓊脂糖掛起來,主要應用于懸浮的腫瘤細胞和轉化細胞系。

又名非錨定依賴性生長實驗,利用軟瓊脂為培養介質,使細胞在懸浮狀態下生長。某些惡性腫瘤細胞,不僅在貼壁狀態下能增殖,在懸浮狀態下也能增殖,進而通過軟瓊脂中形成克隆的能力反映了惡性程度,可用于細胞分化的基礎研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。適用于非錨著依賴性生長的細胞,如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉化細胞系。


軟瓊脂克隆形成.png

軟瓊脂克隆形成實驗步驟

服務流程
優勢

吉滿生物具有多年的細胞培養、細胞處理以及細胞功能檢測的相關經驗,可以滿足不同處理需要的細胞功能檢測實驗。

案例展示
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克隆形成
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單個細胞在體外增殖6代以上(時間約1周以上),其后代所形成的細胞群體,稱為集落或克隆。每個克隆含有50個以上的細胞,大小在0.3 - 1.0mm之間。細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數, 但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖并形成克隆。只有同時具有貼壁和增殖活力的細胞才會形成克隆。

克隆形成率反映細胞的獨立生存能力的強弱,用于評價細胞群體依賴性和增殖能力。由于細胞生物學性狀不同,細胞克隆形成率差別也很大,一般初代培養細胞克隆形成率弱,傳代細胞系強; 二倍體細胞克隆形成率弱,轉化細胞系強;正常細胞克隆形成率弱,腫瘤細胞強??寺⌒纬陕逝c接種密度有一定關系,做克隆形成率測定時,接種細胞一定要分散成單細胞懸液,直接接種在培養皿中,持續一周以上,隨時檢查,到細胞形成克隆時終止培養。

特點

克隆形成實驗可用于評價不同殺傷因素(藥物、基因等)對腫瘤細胞增殖能力或群體依賴性的敏感性,評價細胞在體內成瘤性,癌細胞不一定都可以在體內成瘤,但若體外克隆能力越強,即表明體內成瘤性越強,算是一種模擬體內成瘤的體外實驗。

依據采用的培養介質的不同,分為平板克隆和軟瓊脂克隆兩類。

(1)平板克隆形成:細胞培養在培養基中,應用于貼壁的細胞。

將細胞分離成單細胞懸液,在培養皿中接種培養,根據集落形成數量和大小來檢測細胞增殖能力和致瘤性。適用于貼壁生長細胞和正常培養的細胞。


平板克隆形成.png

平板克隆形成實驗步驟


(2)軟瓊脂克隆形成:細胞被瓊脂糖掛起來,主要應用于懸浮的腫瘤細胞和轉化細胞系。

又名非錨定依賴性生長實驗,利用軟瓊脂為培養介質,使細胞在懸浮狀態下生長。某些惡性腫瘤細胞,不僅在貼壁狀態下能增殖,在懸浮狀態下也能增殖,進而通過軟瓊脂中形成克隆的能力反映了惡性程度,可用于細胞分化的基礎研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。適用于非錨著依賴性生長的細胞,如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉化細胞系。


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