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敲除細胞系構建服務
簡介

CRISPR(clustered, regμlarly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在該機制中,Cas蛋白 (CRISP‐associated protein)含有兩個核酸酶結構域,可以分別切割兩條DNA鏈。一旦與crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA結合形成復合物,Cas蛋白中的核酸酶即可對與復合物結合的DNA進行切割。切割后DNA雙鏈斷裂從而使入侵的外源DNA降解。來自Streptococcus pyogenes的Cas9由于PAM識別序列僅為2個堿基(GG),幾乎可以在所有的基因中找到大量靶點, 因此得到廣泛的應用。Cas9蛋白在目前測試過的幾乎所有生物和細胞中均有活性,包括細菌、酵母、植物、魚、以及哺乳動物細胞。識別 RNA(gRNA)可以通過載體表達或者化學合成后與Cas9蛋白共同進入細胞,對特異DNA序列剪切,從而促使DNA發生 NHEJ(nonhomologous end‐joining)導致的基因缺失或同源重組,實現基因敲除。

吉滿生物研發團隊擁有豐富的細胞系構建和基因編輯項目經驗,致力于為廣大客戶提供定制的基因編輯細胞系構建服務。

我們的服務涵蓋基因敲除細胞系、條件敲除細胞系、基因敲入細胞系、定點突變細胞系、基因激活/抑制細胞系等?;诟咝Х€定的細胞轉染系統和基因編輯系統,我們成功在不同細胞系實現基因編輯,包括但不限于易轉染細胞或難轉染腫瘤細胞、神經細胞、干細胞和其他細胞。


敲除原理.png

敲除細胞系原理圖

特點

CRISPR/Cas9系統已經成為基因編輯的有力工具,用于準確、高效地編輯生物體的基因組。在基因研究、基因治療和基因育種等方面展示出了巨大的應用前景。運用CRISPR技術實現基因編輯,需要將CRISPR/Cas9系統的兩個核心元素sgRNA和Cas9蛋白遞送到細胞內,目前主要有三種遞送形式:

(1)質粒瞬轉:采用分別表達sgRNA和Cas9的DNA質粒(或sgRNA和cas9共表達質粒)共轉染細胞,在細胞內通過質粒瞬時表達gRNA和Cas9蛋白,進而實現對靶基因的編輯。

(2)RNA瞬轉:體外合成sgRNA和表達Cas9蛋白的mRNA,通過瞬時轉染技術將兩者遞送至細胞內,Cas9的mRNA可由細胞翻譯合成Cas9蛋白,進而實現對靶基因編輯。

(3)蛋白瞬轉(RNP):體外將Cas9蛋白和sgRNA混合,二者可以結合形成核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNP),然后通過瞬時轉染技術(脂質體或電轉等)可將RNP復合效應物遞送到細胞內,進而實現對靶基因的編輯。

根據遞送形式以及不同的細胞,可以選擇不同的遞送方法,主要包括:物理方法、化學方法、以及病毒轉導。其中,利用慢病毒轉導質粒和電穿孔遞送RNP是將CRISPR/Cas9導入細胞的兩種主要方法。

吉滿生物可以為客戶提供基因編輯相關的現貨細胞株以及細胞株構建服務。

服務流程
優勢

(1)吉滿生物專注提供病毒包裝服務十余年,穩定細胞系構建服務經驗豐富!

(2)吉滿生物構建的穩定細胞系種子優良,性狀穩定,活力無損!

(3)ISO9001認證的質量體系,嚴格的病毒純化工藝!

(4)上萬篇SCI期刊引用,包括Cell、Science、Nature等頂級期刊!

(5)完善的客戶服務體系,技術支持、項目跟進、售后服務獲得客戶一致好評,確保您訂購無憂!

案例展示
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CRISPR(clustered, regμlarly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在該機制中,Cas蛋白 (CRISP‐associated protein)含有兩個核酸酶結構域,可以分別切割兩條DNA鏈。一旦與crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA結合形成復合物,Cas蛋白中的核酸酶即可對與復合物結合的DNA進行切割。切割后DNA雙鏈斷裂從而使入侵的外源DNA降解。來自Streptococcus pyogenes的Cas9由于PAM識別序列僅為2個堿基(GG),幾乎可以在所有的基因中找到大量靶點, 因此得到廣泛的應用。Cas9蛋白在目前測試過的幾乎所有生物和細胞中均有活性,包括細菌、酵母、植物、魚、以及哺乳動物細胞。識別 RNA(gRNA)可以通過載體表達或者化學合成后與Cas9蛋白共同進入細胞,對特異DNA序列剪切,從而促使DNA發生 NHEJ(nonhomologous end‐joining)導致的基因缺失或同源重組,實現基因敲除。

吉滿生物研發團隊擁有豐富的細胞系構建和基因編輯項目經驗,致力于為廣大客戶提供定制的基因編輯細胞系構建服務。

我們的服務涵蓋基因敲除細胞系、條件敲除細胞系、基因敲入細胞系、定點突變細胞系、基因激活/抑制細胞系等?;诟咝Х€定的細胞轉染系統和基因編輯系統,我們成功在不同細胞系實現基因編輯,包括但不限于易轉染細胞或難轉染腫瘤細胞、神經細胞、干細胞和其他細胞。


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特點

CRISPR/Cas9系統已經成為基因編輯的有力工具,用于準確、高效地編輯生物體的基因組。在基因研究、基因治療和基因育種等方面展示出了巨大的應用前景。運用CRISPR技術實現基因編輯,需要將CRISPR/Cas9系統的兩個核心元素sgRNA和Cas9蛋白遞送到細胞內,目前主要有三種遞送形式:

(1)質粒瞬轉:采用分別表達sgRNA和Cas9的DNA質粒(或sgRNA和cas9共表達質粒)共轉染細胞,在細胞內通過質粒瞬時表達gRNA和Cas9蛋白,進而實現對靶基因的編輯。

(2)RNA瞬轉:體外合成sgRNA和表達Cas9蛋白的mRNA,通過瞬時轉染技術將兩者遞送至細胞內,Cas9的mRNA可由細胞翻譯合成Cas9蛋白,進而實現對靶基因編輯。

(3)蛋白瞬轉(RNP):體外將Cas9蛋白和sgRNA混合,二者可以結合形成核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNP),然后通過瞬時轉染技術(脂質體或電轉等)可將RNP復合效應物遞送到細胞內,進而實現對靶基因的編輯。

根據遞送形式以及不同的細胞,可以選擇不同的遞送方法,主要包括:物理方法、化學方法、以及病毒轉導。其中,利用慢病毒轉導質粒和電穿孔遞送RNP是將CRISPR/Cas9導入細胞的兩種主要方法。

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