CRISPR(clustered, regμlarly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在該機制中,Cas蛋白 (CRISP‐associated protein)含有兩個核酸酶結構域,可以分別切割兩條DNA鏈。一旦與crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA結合形成復合物,Cas蛋白中的核酸酶即可對與復合物結合的DNA進行切割。切割后DNA雙鏈斷裂從而使入侵的外源DNA降解。來自Streptococcus pyogenes的Cas9由于PAM識別序列僅為2個堿基(GG),幾乎可以在所有的基因中找到大量靶點, 因此得到廣泛的應用。Cas9蛋白在目前測試過的幾乎所有生物和細胞中均有活性,包括細菌、酵母、植物、魚、以及哺乳動物細胞。識別 RNA(gRNA)可以通過載體表達或者化學合成后與Cas9蛋白共同進入細胞,對特異DNA序列剪切,從而促使DNA發生 NHEJ(nonhomologous end‐joining)導致的基因缺失或同源重組,實現基因敲除。
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我們的服務涵蓋基因敲除細胞系、條件敲除細胞系、基因敲入細胞系、定點突變細胞系、基因激活/抑制細胞系等?;诟咝Х€定的細胞轉染系統和基因編輯系統,我們成功在不同細胞系實現基因編輯,包括但不限于易轉染細胞或難轉染腫瘤細胞、神經細胞、干細胞和其他細胞。
敲除細胞系原理圖