過表達穩定細胞系(Overexpression Stable Cell Lines)的構建利用慢病毒感染、電轉等技術手段將特定的基因序列整合到宿主細胞的染色體上,使得目的基因能夠在宿主細胞內長期且穩定的表達。
目前常用的構建穩定細胞系的基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉染到宿主細胞并整合到宿主染色體中,用載體中所含的抗性標志進行篩選。最常用的真核表達載體的抗性篩選標志物有嘌呤霉素(puromycin)、殺稻瘟菌素(Blasticidin S)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin),常用G418來代替新霉素進行選擇性篩選。通過篩選得到可穩定表達目的蛋白,或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。
慢病毒幾乎可以感染所有種類的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩定表達,因此,慢病毒常用于制備穩定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株。
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